Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석pre
Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석
Pre-report학과 : 화학 공학과
학번：200
이름 :
담당교수 : 이
실험날짜 : 1. Title
2xxx. 3. 24. Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석2. Object
표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미시료의 단백질 농도를 측정한다.3. Reagent and Apparatus
1) 표준 단백질 용액 - BSA (Bovine Serum Albumin) 용액
2) Bradford 시약
3) test tubes
4) A UV/vis spectrophotometer

4. Experimental Procedure
1) Sample 측정
(1) Sample을 1ml 취하여 glass 시험관 혹은 플라스틱제의 sample tube에
넣는다.
(2) 증류수를 1ml 가한다.
(3) Bradford 시약을 0.5ml 가한다.
(4) Vortex mixer로 잘 교반하고 10분 동안 상온에 방치 후
UV/vis spectrophometer로 595nm 에서 측정한다. 2) 검량선 작성
(1) 표준 단백질 용액을 물로 희석하여 표와 같이 각 농도의 용액을 2ml정도
만든다.
(2) 발색시약 0.5ml를 첨가한다.
(3) 595nm의 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다.최종 BSA 량
[㎍]
표준단백질 용액
[㎖]
water
[㎖]
0
0
2
10
0.5
1.5
20
1
1
30
1.5
0.5
40
2
0
5. Theory
1) 단백질
단백질은 생명체의 구조와 생리 활성을 담당하는 핵심 성분으로 수십 개 이상…(생략)
의 아미노산이 펩티드 결합으로 연결된 구조를 말한다. 단백질은 신체의 구성기능과 에너지를 내는 기능의 두 가지 면에서는 탄수화물이나 지방과 같다. 그러나 단백질은 탄수화물이나 지방 두 영양소와는 달리 신체에서 에너지를 내는데 쓰이지 않는다. 그 대신에 단백질은 체내에 필수적인 중요한 물질들을 만들거나 운반하고, 또는 외부로부터 이물질과 대항해 싸우기도 하며 나아가서는 뼈, 근육과 연결조직을 이루기도 한다. 또 혈액을 응고시키는 데에도 여러가지 종류의 단백질이 필요하다.

2) 단백질 정량
단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써 대부분의 생화학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우 다른 분야보다 결과를 볼 때 까지 뭔가가 잘못 되었다는 것을 알기 어려워, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성 뿐만 아니라, 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로, 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에, 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다.

(1)Bradford
Bradford는 아주 낮은 pH조건이다. 따라서 단백질에 따라 시간이 지날수록 응집이 발생하는 경우가 생길 수 있는데, 이 경우에는 과량의 단백질이 순간적으로 낮은 pH에 노출되면서 나타나는 현상으로 보인다. 그 이유는 total extract는 한 종류만이 아니라 다양한 많은 종류의 단백질들이 섞여 있기 때문으로 단백질 고유의 특성에 의한 응집으로 보기 어렵기 때문이다. 이런 경우엔, 단백질 용액을 약간 희석하여 사용하면 문제가 해결될 수 있다.


산성용액에서 Coomassie brilliantblue 염료는 단백질과 결합하게 되고,